热休克蛋白90对人肝癌细胞自噬相关转录因子EB的调控机制

更新时间:2023-05-28

【摘要】本文旨在研究热休克蛋白90 (heat shock protein 90, Hsp90)对肝癌细胞自噬相关转录因子EB (transcription factor EB,TFEB)的调控机制。体外培养人肝癌细胞株HepG2,分别用Hsp90的N端抑制剂STA9090和C端抑制剂Novobiocin处理,用Western blot和RT-PCR检测TFEB和自噬相关蛋白的表达情况,用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)实验检测Hsp90与TFEB近启动子区的结合情况,用双荧光素酶报告基因实验检测Hsp90对TFEB启动子活性的影响。结果显示,低氧诱导HepG2细胞TFEB蛋白和mRNA表达水平上调。在常氧及低氧条件下,用STA9090和Novobiocin分别处理HepG2细胞后,TFEB和LC3、P62蛋白表达水平均显著下降。转染Hsp90α表达质粒可上调野生型和Hsp90α敲除的HepG2细胞TFEB蛋白表达水平。Hsp90可结合于TFEB近启动子区,参与调控其转录过程,而STA9090和Novobiocin均可抑制Hsp90与TFEB近启动子区的结合能力,降低TFEB启动子活性。以上结果提示,Hsp90通过与人肝癌细胞TFEB近启动子区的结合促进TFEB转录,从而上调自噬相关蛋白LC3、P62表达水平。

【关键词】 热休克蛋白90 转录因子EB 自噬 原发性肝癌

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